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非洲豬瘟解決方案

2021-05-10文章來(lái)源：takarabiomed
 
    非洲豬瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）是一種古老的、高度傳染的、能夠使家豬和野豬致死的病毒，2018年8月中國確診首例非洲豬瘟疫情開(kāi)始，一年多的時(shí)間，非洲豬瘟已經(jīng)席卷了黑龍江、江蘇、浙江、內蒙古、遼寧、山西等多個(gè)省份，給養殖業(yè)帶來(lái)了巨大損失，豬肉價(jià)格也節節攀升登上歷史高位。
    通過(guò)實(shí)驗室檢測，對非洲豬瘟病毒進(jìn)行快速、可靠的早期診斷，對于防止疫病的傳播非常重要和必要的。根據2018年8月中國動(dòng)物衛生與流行病學(xué)中心和中國動(dòng)物疫病預防控制中心編制的《非洲豬瘟病毒檢測操作規程》，需要使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對非洲豬瘟病毒進(jìn)行檢測。
    Takara作為分子生物學(xué)試劑行業(yè)內的重要一員，多年來(lái)持續不斷地為中國各科研院校、檢驗檢疫單位和各種檢測機構提供性能穩定、高效高質(zhì)量的研究用試劑，受到廣大生物學(xué)研究人員的支持和好評。Takara可以提供從探針、引物合成到定量PCR檢測的多種靈活的非洲豬瘟病毒ASFV檢測解決方案。
 
 
 
 
根據2003年發(fā)表于《Journal of Virological Methods》期刊的文獻《Development of a TaqMan PCR assay with internal amplification control for the detection of African swine fever virus》，探針?lè )ǘ縋CR擴增ASFV的主要免疫原基因VP72的3'保守區， PCR引物和探針序列如下表：
 
 
 
 
 
★ MightyPrep reagent for DNA（Code No. 9182）是用于從小鼠尾等動(dòng)物組織及植物組織、血液、加工食品、土壤、菌體等中簡(jiǎn)便、高收量的制備PCR用模板DNA的試劑。使用時(shí)在樣品中添加本試劑，僅需95℃加熱10分鐘即可簡(jiǎn)易提取DNA。
 
◆ 添加試劑（MightyPrep reagent for DNA）后，僅需95℃加熱10分鐘即可簡(jiǎn)易提取DNA。
◆ 只有一種添加試劑！可直接使用。
◆ 與阻害物抵抗性高的PCR試劑配套使用，可對寬廣范圍內的樣品進(jìn)行PCR擴增。
 
 
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★ Probe qPCR Mix（Code No. RR391A）是采用探針?lè )ㄟM(jìn)行Real Time PCR（qPCR）檢測的試劑。 通過(guò)對添加了抗體的Hot Start PCR酶和Real Time PCR用Buffer分別進(jìn)行了改良，實(shí)現了PCR阻害物抵抗性高、擴增特異性高、擴增效率高、檢測靈敏度高。
 
各種PCR阻害物對Ct值的影響評價(jià)
已知血紅素（血液成分）、腐植酸（土壤成分）、黑色素（皮膚和毛發(fā)成分）、單寧酸（植物成分）對PCR反應有很強的阻害作用，對在PCR反應中添加PCR阻害物的反應體系和未添加PCR阻害物的反應體系進(jìn)行了Ct值比較。 本制品同其他公司同類(lèi)制品相比，對PCR阻害物的抵抗性顯著(zhù)提高，使用目前為止不能獲得良好反應結果的檢測樣品也能夠期待 獲得高成功率、高檢測靈敏度的PCR反應。
 
 
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★ TaKaRa MiniBEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver.5.0 (Code No. 9766)是專(zhuān)門(mén)用于從血漿、全血、無(wú)細胞體液、病毒原液和感染病毒的組織中提取各種病毒 (Virus) RNA/DNA的小量純化試劑盒，具有高效、快速、方便之特點(diǎn)，病毒裂解后，提取操作僅需20分鐘便可完成。
 
★ Premix Ex Taq? (Probe qPCR)（Code No. RR390）是采用探針?lè )ㄟM(jìn)行Real Time PCR (qPCR) 反應的專(zhuān)用試劑，可用于快速PCR。Premix Ex Taq是一種2×濃度的Premix Type試劑，進(jìn)行實(shí)驗時(shí)，PCR反應液的配制十分方便簡(jiǎn)單。
 
Mix中添加了Tli RNaseH (耐熱性RNaseH)，以cDNA 作為模板進(jìn)行PCR反應時(shí)，可以很好地抑制由于cDNA中殘存mRNA對PCR反應造成的阻害作用。本制品可以在寬廣的定量區域內得到良好的標準曲線(xiàn)，對靶基因進(jìn)行準確定量、檢測，重復性好，可信度高。
 
 
★ PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix (or with UNG)（Code No. RR650/RR651）是基于探針?lè )z測 的一步法Real Time RT-PCR試劑。本制品為2× premix型試劑，只需添加用于檢測目的基因的引物、探針和模板即可進(jìn)行反應。由于本制品在反應液中能夠直接從生物樣本中提取核酸，對于含有RNA病毒等的生物樣品，可直接添加到反應液中進(jìn)行Real Time PCR反應。由于核酸提取、反轉錄、qPCR各反應連續進(jìn)行，大大提高了操作簡(jiǎn)便性，減少了反應時(shí)間。
 
活體樣品起始簡(jiǎn)便快速進(jìn)行Real Time PCR檢測
   
探針?lè )╫ne step RT-qPCR premix試劑
   
血液、尿液等樣品無(wú)需RNA純化也可進(jìn)行Real Time PCR
   
通過(guò)UNG的作用，可以有效防止carryover contamination產(chǎn)生的假陽(yáng)性
※ 使用PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix，with UNG（Code No. RR651）時(shí)通過(guò)UNG的作用，可以有效防止carryover contamination產(chǎn)生的假陽(yáng)性
 
 
 
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