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Code No.
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產(chǎn)品名稱(chēng)
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630491
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Matchmaker® Gold Yeast One-Hybrid Library Screening System
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630496
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Matchmaker® Insert Check PCR Mix 1
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■ 制品說(shuō)明
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酵母單雜交系統—Matchmaker Gold
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Clontech Matchmaker Gold酵母單雜交（Y1H）文庫篩選系統為鑒定蛋白質(zhì)-DNA相互作用提供了簡(jiǎn)便高效的方法。所有的Matchmaker Gold系統均采用篩選強度較高的Aureobasidin A（AbAr）抗生素報告基因。這種新型的報告子可以高效殺死非抗性克隆，從而大大降低了背景克隆的生長(cháng)。
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Matchmaker Gold酵母單雜交系統
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在Matchmaker Gold酵母單雜交系統中，目標/bait DNA序列重復串聯(lián)后克隆到pAbAi報告載體上。用同源重組的方法將攜帶bait的pAbAi載體整合到Y1HGold酵母基因組中，用于后續文庫的篩選。
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一步法構建和篩選文庫
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在文庫中，可能與bait DNA序列相互作用的prey蛋白的cDNA與GAL4 AD融合表達，文庫通過(guò)SMART技術(shù)與同源重組技術(shù)直接構建于Y1HGold[Bait-AbAi]報告菌株中。當prey蛋白與bait序列結合時(shí)，相應的GAL4 AD會(huì )激活AbAr的表達，酵母可在添加了AbA的培養基上生長(cháng)。在文庫篩選中，編碼prey蛋白的質(zhì)?？梢暂^容易地從酵母克隆中分離出來(lái)進(jìn)行后續的驗證分析。
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快速獲得結果！
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Matchmaker Gold 單雜交文庫篩選過(guò)程直接、快速、簡(jiǎn)單！
第一步：將1-3個(gè)目標DNA序列（bait）重復串聯(lián)后克隆到pAbAi中。
第二步：將線(xiàn)性化的pBait-AbAi載體整合到Y1HGold酵母基因組中，獲得攜帶bait的酵母菌株，
并在SD/-Ura培養基上篩選。
第三步：利用Insert Check PCR Mix 1，通過(guò)PCR對整合到酵母基因組的bait DNA序列進(jìn)行驗證分析。
第四步：利用SMART技術(shù)合成與線(xiàn)性化的pGADT7-Rec末端具有相同序列的Prey蛋白的cDNA。
第五步：將合成的cDNA和線(xiàn)性化的pGADT7-Rec共轉化到上述Y1HGold bait菌株中構建文庫，同
時(shí)利用AbA選擇培養基進(jìn)行篩選。
第六步：收集獲得的陽(yáng)性克隆，并用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2對文庫中的插入片段進(jìn)行分析。
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菌落PCR分析
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在Y1H及Y2H篩選中，菌落PCR是分析bait菌株并對陽(yáng)性克隆進(jìn)行分類(lèi)的簡(jiǎn)便、快速的方法。用Matchmaker Insert Check PCR Mix 1可以驗證整合到Y1H酵母基因組的bait DNA序列，用Matchmaker Insert Check PCR Mix 2可以快速分析單雜及雙雜篩選中陽(yáng)性克隆子的插入片段。
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酵母單雜交培養基
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我們的酵母單雜交培養基套裝里包含有配套于Clontech Matchmaker Gold One-Hybrid操作中所用到的全套的培養基。
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■ 制品特點(diǎn)
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1. 表現較好的酵母單雜交系統
2. AbA抗性篩選大大消除背景克隆
3. 在酵母體內直接完成文庫構建和篩選
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產(chǎn)品詳情請點(diǎn)擊以下鏈接：
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http://www.clontech.com/CN/Products/Protein_Interactions_and_Profiling/Yeast_
OneHybrid/Matchmaker_Gold_Yeast_One-Hybrid_System?sitex=10022:22372:US
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